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本試劑盒用于體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生帶有FITC、Cy3、Cy5、Biotin、DIG等修飾RNA探針，獲得的RNA探針適合原位雜交，Northern blot雜交，RNA蛋白相互作用�？梢赃m當(dāng)滲入FITC/Cy3/Cy5/DIG/Bio等，片段在500-1200之間，標(biāo)記效率已優(yōu)化。修飾后的RNA探針可通過光譜儀檢測。
組成
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Cat. No |
Product Name |
Size |
Number |
Store |
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R5210-1 |
T7 RNA 聚合酶Buffer（10X） |
50ul |
1 |
-20℃ |
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R5210-2 |
T7 RNA聚合酶 |
50ul |
1 |
-20℃ |
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R5210-3 |
NTP Mix（Cy5） |
200ul |
1 |
-20℃ |
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R5210-5 |
DNA質(zhì)控模板 |
5ul |
1 |
-20℃ |
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R5210-6 |
RNase Inhibitor |
25ul |
1 |
-20℃ |
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R5210-7 |
無核酸酶水 |
1ml |
1 |
-20℃ |
DNA模板獲得
DNA模板可以是質(zhì)粒DNA、寡核苷酸退火雙鏈、PCR產(chǎn)物或cDNA等等。
DNA模板必須是線性的，包含轉(zhuǎn)錄起始位點的T7 RNA聚合酶啟動子序列。
實驗操作
（1）模板準(zhǔn)備：
1）添加T7 啟動子序列，引物擴增目的基因片段（我公司可以提供）。
2）寡核苷酸退火提供PCR片段（我公司可以提供）。
3）cDNA合成的制備的模板。
4）務(wù)必將需要帶有T7啟動子序列引入的基因組序列。
（2）戴好手套，口罩，冰上操作，按以下順序配制反應(yīng)混合液；
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10×Buffer |
2ul |
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NTP Mix（Cy5、Cy3等） |
8ul |
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DNA模板 |
0.2-1ug |
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RNase Inhibitor |
1ul |
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T7 RNA聚合酶 |
2ul |
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無核酸酶水 |
Xul,Add to 20ul |
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Total |
20ul |
（3）用槍頭輕輕混勻，在37°C條件下孵育1-2小時；對小短片段，需要孵育4小時；
（4）膠回收純化合成的RNA、或乙醇沉淀純化的RNA，可凝膠電泳檢測轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物；
（5）熒光效率標(biāo)記和濃度可以通過光譜儀或核酸檢測儀。
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