1.實(shí)驗(yàn)試劑、材料與儀器
試劑：1mol/L NaOH溶液、2×SSC/0.1%NP-40（洗液）、75%、85%、100%乙醇、變性液、DAPI、
材料：蓋玻片、0.2ml PCR管、濕盒、
儀器：水浴鍋、PCR儀、染缸、玻片盒、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱
2.實(shí)驗(yàn)步驟
（1）精子涂片
（2）精子核去凝集
劃定雜交區(qū)域（約20×20 mm），滴加1mol/L NaOH覆蓋雜交區(qū)，在顯微鏡下觀察，直到精子頭部是原來(lái)的2倍，且精子頭部呈圓形，邊緣清晰，約1.5-2min。2×SSC浸泡2min，洗去NaOH（后續(xù)實(shí)驗(yàn)須在pH7.0-8.0條件下進(jìn)行，必須除去殘留的NaOH）；
（3）老化
2×SSC浸泡10min。
（4）脫水
依次在75%、85%、100%乙醇中浸泡2min，晾干。
將75%、85%、100%乙醇放入冰箱-20℃預(yù)冷，待變性后脫水用。
（5）變性
加入約20mlDNA變性液到玻片盒，水浴加熱至77±2℃，輕輕將玻片放入玻片盒中，77±2℃變性5min，取出后馬上依次放入預(yù)冷的75%、85%、100%乙醇各2min，晾干。
注意：必須等玻片的雜交區(qū)域完全干燥，再滴加探針。
以下步驟，注意避光
（6）探針準(zhǔn)備
按每張片子6μl探針計(jì)，根據(jù)片子數(shù)量n，微量移液器取6×n μl探針至0.2ml PCR管，探針94℃變性4min，37℃平衡2min。
（7）雜交
平衡后的探針滴加在標(biāo)本上，蓋蓋玻片，放入濕盒中，37℃-42℃雜交過(guò)夜。
（8）洗滌
將玻片移至已經(jīng)預(yù)熱至42℃的洗液中，浸泡5min，再移至常溫的洗液，浸泡5min.
（9）復(fù)染
滴加20μl DAPI，蓋蓋玻片，暗處?kù)o置15min，熒光顯微鏡觀察（先用低倍鏡找到視野，再用100倍油鏡觀察）。
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