外周血的淋巴細(xì)胞是一種已成熟的不具有進(jìn)行有絲分裂能力的細(xì)胞，故不能直接用其制備染色體標(biāo)本。但淋巴細(xì)e胞在植物凝集素（PHA）的刺激下，能轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂屑?xì)胞分裂能力的母細(xì)胞。因此，外周血必須經(jīng)過含有PHA的培養(yǎng)液培養(yǎng)后，才能制備供核型分析染色體標(biāo)本。
1 試劑
（1）淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液配制
RPMI1640液 80%
小牛血清 20%
PHA 適量（根據(jù)廠家說明書的使用量）
肝素 100單位
雙抗 100單位/毫升
細(xì)胞生長因子 適量
最后將配好培養(yǎng)液的酸堿度調(diào)PH=7.2-7.4，在無菌的條件下進(jìn)行配制分裝。然后進(jìn)行分裝，每瓶4.5毫升，-20℃保存。
（2）10μg/ml 秋水仙素;
（3）0.075M 低滲液： 2.795g KCl + 500ml 蒸餾水
（4） 固定液 ——甲醇：冰醋酸=3:1（該試劑必需現(xiàn)配現(xiàn)用）
2 采血與細(xì)胞培養(yǎng)
用無菌注射器吸取0.2%肝素液0.2毫升（或100單位肝素）濕潤針筒，抽取被檢者靜脈血約2毫升，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)針筒，使之與肝素混勻，再將解凍至37℃的培養(yǎng)液的瓶蓋用酒精棉球擦凈消毒，直接用注射器從瓶蓋上插入，每瓶接種0.2-0.4毫升的外周血，搖勻后于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，如果外周血樣本不需要保留，注射器不需吸取肝素，直接抽血，立即接種到培養(yǎng)瓶內(nèi)，搖勻后培養(yǎng)。這一方法減少污染機(jī)會(huì)，同時(shí)降低肝素的用量（培養(yǎng)液中已含肝素），肝素量過大，會(huì)引起溶血。
3 制備中期染色體
3.1 秋水仙素處理
加秋水仙素的時(shí)間根據(jù)檢查目的而定。如果檢查放射損傷后染色體畸變應(yīng)在培養(yǎng)44-54小時(shí)后加秋水仙素，這樣可避免一部分畸變的染色體丟失；如果用于染色體疾病的診斷，則在培養(yǎng)66-70小時(shí)加秋水仙素，以積累更多的分裂中期細(xì)胞。
加入秋水仙素?fù)u勻后，置37℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)4-6小時(shí)，終止培養(yǎng)收集細(xì)胞。
3.2 低滲處理
將培養(yǎng)物倒入10毫升的刻度離心管內(nèi)，平衡離心、離心速度1000-1500轉(zhuǎn)/分，時(shí)間8-10分鐘。小心吸去上清，加入8毫升預(yù)熱37℃的低滲液，用吸管將現(xiàn)溶物打勻，置37℃水浴15-20分鐘。使白細(xì)胞膨脹，染色體分散，紅細(xì)胞解體。
3.3 預(yù)固定
低滲后，立即加入1毫升新配的固定液，輕輕打勻，1000-1500轉(zhuǎn)/分，離心8-10分鐘。3.3 固定
離心后棄上清，留下管底的細(xì)胞，緩慢加入固定液約8毫升并輕輕打勻，37℃水浴30分鐘；第一次固定時(shí)，先加數(shù)滴，輕輕將細(xì)胞打勻，再慢慢加至8毫升，打勻，這樣染色體標(biāo)本的形態(tài)較好。1000-1500轉(zhuǎn)/分，離心8-10分鐘。
3.4 再固定
離心后，棄上清，加入8毫升固定液，打勻。于37℃水浴30分鐘，平衡離心、離心速度1000-1500轉(zhuǎn)/分，時(shí)間8-10分鐘。
3.5 制片
離心后，棄上清，根據(jù)沉淀的細(xì)胞量，加入適量的固定液打勻，將細(xì)胞懸液滴入1-2滴于預(yù)凍的干凈玻片中央，隨即吹氣，輕輕過火，空氣晾干。
注意事項(xiàng)
①器皿洗滌一定要干凈，不能有酸堿殘留。
②接種外周血不能太多或太少
③培養(yǎng)細(xì)胞溫度37±0.5℃
④秋水仙素一定要避光保存，配制后使用期不能超過半年，秋水仙素的處理時(shí)間不要少于4小時(shí)，也不要超過6小時(shí)。
⑤低滲的時(shí)間、溫度會(huì)影響染色體的分散和分裂相的數(shù)目。
⑥離心機(jī)最好用水平式，轉(zhuǎn)速過快過慢直接影響標(biāo)本片的質(zhì)量。
⑦固定液一定要現(xiàn)用現(xiàn)配，固定要徹底，每次不少于30分鐘，加固定液不能過快，要沿管壁慢慢加入，否則染色體容易扭轉(zhuǎn)；固定作用不足，染色體出現(xiàn)毛刷狀。
⑧玻片的清潔度、冷凍溫度會(huì)影響染色體的鋪展。
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