染色體顯帶技術(shù)常用的有熒光Q-帶、Giemsa G-帶、異染色質(zhì)的C-帶等。這里介紹較為常的Giensa G -帶C-帶技術(shù)。
1. G-顯帶染色體標(biāo)本的制備
方法一:
(1)將配制好的0.25%的胰蛋白酶溶液60毫升倒入立式染色缸內(nèi),37℃水溶預(yù)熱,用3% Tris調(diào)pH=7
(2)將標(biāo)本片浸入胰酶溶液中,不斷輕輕擺動(dòng),新鮮標(biāo)本只需處理3-9秒鐘,老標(biāo)本則需處理3-5分鐘。
(3)立即投入1:10或1:20的Giemsa工作液,染色15-20分鐘
(4)自來(lái)水沖凈,氣干。
方法二:
(1)45毫升生理鹽水或雙蒸水倒入立式染色缸內(nèi),加入已配好的2%胰酶液5毫升,用3% Tris溶液調(diào)pH=7于37℃預(yù)熱。
(2)把染色體標(biāo)本片浸入37℃上述胰酶工作液中,略加搖動(dòng),處理30秒左右。
(3)取出后立即用1:10Giemsa工作液染色8-10分鐘,自來(lái)水沖凈。
注意事項(xiàng)
①胰酶的品質(zhì)會(huì)直接影響顯帶的質(zhì)量,購(gòu)買品牌試劑較保險(xiǎn)。
②胰酶的活性與pH值和溫度有關(guān),在pH=7溫度37℃狀態(tài)下,胰酶活性最高。
③胰酶處理時(shí)間長(zhǎng)短與標(biāo)本片片齡有關(guān),新鮮的標(biāo)本處理時(shí)間短,且?guī)Ъy較清晰,建議標(biāo)本片的片齡在2-7天內(nèi)較適宜。
④Giemsa工作液要現(xiàn)用現(xiàn)配
⑤胰酶工作液長(zhǎng)時(shí)間置37℃水浴,容易渾濁污染,應(yīng)棄之。
2. C-帶染色體標(biāo)本的制備
C顯帶特點(diǎn):對(duì)染色體中的結(jié)構(gòu)性異染色質(zhì)容易染色,對(duì)常染色質(zhì)只能顯示較淡的輪廓。
C顯帶所顯示著較深的結(jié)構(gòu)部位:
①各染色體的著絲粒;
②各近端著絲粒的部位;
③在1、9、16號(hào)染色體具有次縊痕的位置上;
④Y染色體的長(zhǎng)臂遠(yuǎn)端,此部分系Y染色質(zhì)部分。其它部分著色很淡。
核型分析過(guò)程,對(duì)某些染色體變異問(wèn)題,往往需要C顯帶技術(shù)與G顯帶技術(shù)結(jié)合分析,更能準(zhǔn)確判斷染色體、體的畸變。
方法一:
(1)將常規(guī)制備染色體標(biāo)本片放入0.2NHCL溶液中,室溫下,處理15-30分鐘;
(2)自來(lái)水沖凈后,再將標(biāo)本片浸入預(yù)溫到65℃的5% Ba(OH)2溶液中,處理10分鐘;
(3)自來(lái)水沖凈后,再把標(biāo)本片投入預(yù)溫到65℃的2×SSC溶液中,處理1-1.5小時(shí);
(4)自來(lái)水沖凈后,用1:10 Giemsa工作液染色0.5-1小時(shí);
(5)自來(lái)水沖凈,氣干。
方法二:
(1)將制好的標(biāo)本片放入0.2N HCL中,室溫下1小時(shí);
(2)水洗凈(均用自來(lái)水沖洗);
(3)浸入1% Ba(OH)2水溶液中,溫度預(yù)熱到50℃,處理時(shí)間15-20秒;
(4)水洗凈
(5)浸入預(yù)溫到60℃的2×SSC溶液中,處理90分鐘。
(6)用水徹底沖凈;
(7)1:10 Giemsa染色液染色10-15分鐘
(8)水沖凈、氣干。
注意事項(xiàng)
①標(biāo)本片年齡不能超過(guò)一個(gè)月;
②各種處理溶液一定要達(dá)到所需的溫度時(shí),才放入表本片進(jìn)行處理;
③每一步處理后,要立即用自來(lái)水徹底沖凈后,才進(jìn)行下一步處理。
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