骨髓染色體標(biāo)本制備通常用于白血病患者,特別是急慢性粒細(xì)胞的白血病的檢查,也適用于淋巴細(xì)胞性白血病。骨髓細(xì)胞處于生長(zhǎng)分裂期,可以直接取樣制備染色體標(biāo)本片,為了增加細(xì)胞的分裂相數(shù)量,可在加入秋水仙素的培養(yǎng)液中作短暫的培養(yǎng)。再收集細(xì)胞制備染色體標(biāo)本片,會(huì)獲得較滿(mǎn)意的分裂相數(shù)目。
1. 骨髓細(xì)胞短期培養(yǎng)法
培養(yǎng)液配方:RPMI 1640 80%
小牛血清 20%
雙抗 100單位/毫升
肝素 100單位
配好后分裝成每瓶5毫升,冰凍保存,用滅菌的注射器從髓骨抽取骨髓液0.2-0.4毫升,直接注入預(yù)熱37℃的培養(yǎng)液中搖勻,37℃培養(yǎng)24-48小時(shí)后,加入秋仙素(10微克/毫升)0.1毫升,繼續(xù)培養(yǎng)4-6小時(shí),終止培養(yǎng)收集細(xì)胞。
低滲、固定、制片等步驟與外周血染色體標(biāo)本制備相同。
2. 骨髓細(xì)胞直接制片法
用滅菌的注射器從隋骨抽取骨髓液0.3-0.5毫升,立即注入含秋仙素0.1-0.05微克/毫升的生理鹽水(5毫升)中,用滴管輕輕吸動(dòng),將骨髓的脂肪顆粒充分洗掉,平衡離心速度1000-1500轉(zhuǎn)/分,時(shí)間8-10分鐘,棄上清。加入含同樣秋水仙素濃度的生理鹽水2-3毫升,37℃放置2-3小時(shí),平衡離心,時(shí)間速度同上,棄上清。加低滲液5毫升,打勻后37℃水浴10-15分鐘,離心棄上清,固定、制片的方法按外周血染色體標(biāo)本制備進(jìn)行。
3. 注意事項(xiàng)
(1)骨髓染色體標(biāo)片制備的成敗,首先取決于骨髓液,抽取骨髓太少或太稀,細(xì)胞數(shù)量過(guò)少,不易獲得較多的中期細(xì)胞,要進(jìn)行核型分析就更困難了。故要足夠的骨髓量和細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)量要求達(dá)3×106/毫升。通常作短期培養(yǎng)能增加細(xì)胞數(shù)目,提高成功率。
(2)骨髓材料中脂肪顆粒較多,必須充分洗掉,否則影響標(biāo)片的質(zhì)量。
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