蛋白酶熒光檢測(cè)試劑盒 V1
貨號(hào): 001.41 試劑盒：100 T 運(yùn)輸：4℃， 儲(chǔ)存:–20℃
產(chǎn)品描述：蛋白酶熒光檢測(cè)試劑盒是即用型，簡(jiǎn)單便捷。主要檢測(cè)蛋白酶活性的存在, 原理是利用異硫氰酸熒光素 (FITC) 標(biāo)記的酪蛋白作為底物，熒光被淬滅，蛋白降解后，釋放熒光。本試劑盒可檢測(cè)多種蛋白酶。適用于檢測(cè)絲氨酸、半胱氨酸、金屬和天冬氨酸蛋白酶等。蛋白酶降解導(dǎo)致FITC標(biāo)記的酪蛋白底物裂解成更小的片段，在酸性條件下這些片段處于溶解狀態(tài)。測(cè)量FITC標(biāo)記片段的熒光，激發(fā)波長(zhǎng):485 nm，發(fā)射波長(zhǎng):535 nm，間接反映酶的存在。靈敏度：所述試劑盒程序檢測(cè)濃度為 50ng每個(gè)反應(yīng)
試劑盒組成：
A：蛋白酶反應(yīng)緩沖液2X：5ml
B：三氯乙酸 (TCA) 溶液10X：5mL 6.1 N
C：異硫氰酸熒光素 (FITC)：100ul
D：陽(yáng)性對(duì)照：胰蛋白酶，20 mg
步驟：
1. 對(duì)于每個(gè)測(cè)試樣品，將 40 uL 孵育緩沖液與10-40uL 測(cè)試樣品加入微量離心管中。對(duì)于具有高蛋白酶活性的測(cè)試樣品，可能需要進(jìn)行樣品稀釋。
2. 陽(yáng)性對(duì)照樣品：向微量離心管中加入 40 µL 孵育緩沖液、和 10 µL 胰蛋白酶對(duì)照樣本，制備適當(dāng)?shù)膶?duì)照樣本（參見對(duì)照樣本）。
3. 空白對(duì)照：向微量離心管中加入 40uL孵育緩沖液，10-40uL超純水，制備空白樣品。
4. 輕輕混合，因?yàn)檫^度的湍流可能會(huì)導(dǎo)致高熒光背景并降低檢測(cè)的靈敏度。 觀察熒光變化。最長(zhǎng)孵育至 24 小時(shí)，可提高靈敏度。注意不要超過 24 小時(shí)，因?yàn)?span> FITC-酪蛋白可能開始降解，導(dǎo)致高熒光增高。
5. 孵育后，向每個(gè)微量離心管中加入40μL的1X TCA 溶液。
6. 輕輕混合并在 37°C 避光孵育 30 -60分鐘。
7熒光測(cè)量：熒光定量PCR儀，熒光檢測(cè)儀，熒光酶標(biāo)儀均可。在 485 nm 處激發(fā)的熒光強(qiáng)度并監(jiān)測(cè) 535 nm 的發(fā)射波長(zhǎng)。
8.檢測(cè)限：產(chǎn)生顯著熒光讀數(shù)高于空白樣品所得值的蛋白酶量，通常是50ng。
9.讀數(shù)等于用空白樣品獲得的值的 1.2倍 被認(rèn)為陽(yáng)性。
10.將胰蛋白酶對(duì)照溶液配制成20mg/ml，即1ug/uL。再得到10ng/ul 的對(duì)照溶液，加入5uL。
11.異硫氰酸熒光素作為可能的儀器校準(zhǔn)或確定 FITC 信號(hào)的線性范圍的對(duì)照。
注意事項(xiàng)：僅供研發(fā)使用, 不用于藥物、診斷或其他用途。
