T細(xì)胞受體（TCR）基因重排的PCR和FISH檢測與意義

1.TCR基本概念：

T 細(xì)胞受體（TCR）是由兩個多肽組成的膜結(jié)合異二聚體。異源二聚體由兩條多肽鏈（ab 或 gd多肽鏈），它們通過二硫鍵連接在一起并與一個細(xì)胞質(zhì)膜結(jié)合的復(fù)合蛋白，統(tǒng)稱為 CD3。

在外周血中，大多數(shù) T 細(xì)胞表達(dá) ab 受體，約15%的 T 細(xì)胞表達(dá) gd 受體。TCR 胞外結(jié)構(gòu)域由一個恒定（C）結(jié)構(gòu)域和一個可變（V）結(jié)構(gòu)域組成。

TCR V 結(jié)構(gòu)域內(nèi)編碼的互補(bǔ)性決定區(qū)（CDR）。與多肽抗原和主要組織相容性(MHC) 分子接觸，從而賦予 TCR 特異性。此外，T細(xì)胞是受 MHC 限制的，因為 CD4 陽性或輔助 T 細(xì)胞識別與 MHC-II類分子結(jié)合的肽，而 CD8 陽性或抑制性T 細(xì)胞識別與 MHC I 類分子結(jié)合的肽。因此，檢測TCR，其實就是了解T細(xì)胞的更詳細(xì)的功能。

2.基因重排檢測方法：

基因重排是T 細(xì)胞發(fā)生過程中的一個重要事件，它能使 T 細(xì)胞特異性地識別抗原，這一過程中的任何變化都可能導(dǎo)致疾病。檢測手段包括Southern印跡雜交、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) 、FISH和流式細(xì)胞術(shù)等技術(shù)。

3基因重排與臨床：

檢測 T 細(xì)胞增殖的特征變化。在臨床疾病中T細(xì)胞增殖異常，包括免疫缺陷、自身免疫和過敏性疾病中 T 細(xì)胞增殖的特征和變態(tài)反應(yīng)。此外，淋巴細(xì)胞疾病及其與反應(yīng)性淋巴細(xì)胞增生，監(jiān)測MRD病和 CD8+ 淋巴細(xì)胞增多癥患者。還可以監(jiān)測治療或骨髓移植后的 MRD。

4.檢測缺陷：

PCR 引物較多，變異性大，會發(fā)生一定的假陰性發(fā)生率。盡管很多研究使用了共識引物，但是PCR 技術(shù)的假陰性發(fā)生率也很高，因此研究者仍然需要設(shè)計更好的引物，不斷優(yōu)化。

5.TCR檢測帶來的問題

TCR能否用原位雜交檢測呢？實際上TCR是可以用原位雜交檢測的，但是要根據(jù)具體序列來判斷，如果序列差異比較大，可以用原位雜交來檢測，如果基因差異比較小，比如相差幾個堿基，那么只能用滾環(huán)復(fù)制的原位雜交（RCA-FISH）來檢測。一般來說用PCR來檢測是可以，當(dāng)然測序也可以檢測。

6.常見的檢測引物位置：

目前，大部分引物都被公布在各種文獻(xiàn)，可以查閱到。

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